各菌株をLBPに利用するために効果的に培養するには、適切な培養条件と栄養組成の決定が不可欠です。有望な腸内微生物種である フィーカリバクテリウム・ダンカニエの生産という、挑戦的で魅力的な世界を覗いてみましょう!
フィーカリバクテリウム・ダンカニエ:有望だが培養が難しい微生物
ファーカリバクテリウム属のいくつかの腸内微生物種は、消化器系疾患や全身性疾患に対する多様な保護効果を持つことから、医薬応用において有望な候補とされています。
ヒト腸内におけるフィーカリバクテリウムの豊富さは、以下のような疾患と負の相関関係を持つことが示されています:
- がん
- アトピー性疾患
- 腸や腸内代謝に関連する疾患
これらの微生物は、以下の疾患に対する治療の可能性についても研究されています。
- 炎症
- 大腸炎
- 糖尿病
- 肥満
フェーカリバクテリウム属の微生物種を培養することは、極度の酸素感受性と比較的未知の栄養要求のため、特に困難です。
それでも、臨床研究や幅広い応用を可能にするためには、現行のGMP(適正製造規範)に従ってフェーカリバクテリウムの培養方法を改良することが強く求められています。
フィーカリバクテリウム・ダンカニエの栽培に関する科学研究
ETHチューリッヒの研究者は、最近、動物由来原料を使わずにフィーカリバクテリウム・ダンカニエを培養する方法を探りました。
最初のステップでは、さまざまな条件下でマイクロタイタープレートを用いてフィーカリバクテリウム・ダンカニエの成長を評価し、6種類の酵母由来栄養素をスクリーニングしました。次に、研究者はバイオリアクターで最も良好な成長性能を示した3種類の酵母由来栄養素をテストしました。
第2ステップでは、8種類のビタミンB群を異なる投与量で試験し、フィーカリバクテリウム・ダンカニエに対する成長促進効果を調べました。
最後に、酵母由来栄養素とビタミンB群の組み合わせのうち、フィーカリバクテリウム・ダンカニエの成長に最も効果的なものを検証しました。
フィーカリバクテリウム・ダンカニエ栽培に酵母由来栄養素を使用する利点
科学者らは、フィーカリバクテリウム・ダンカニエ栽培における酵母抽出物の成長促進効果が投与量に依存することを確認しました。酵母抽出物は、タンパク質・ペプチド・アミノ酸などの窒素栄養素や、ビタミン・微量元素などの成長因子を豊富に含むため、フィーカリバクテリウム・ダンカニエの成長を効果的に支えました。
一方で、酵母ペプトンは主要栄養素の重要な供給源となるものの、フィーカリバクテリウム・ダンカニエの成長に必要な微量栄養素が不足していることも示されました。したがって、酵母ペプトンは必須成長因子を適切に補った培地、またはこれらの成長因子を自然に豊富に含む酵母抽出物と併用する形でのみ利用すべきです。
文献ではフィーカリバクテリウム・ダンカニエに複数のBビタミン要求性が報告されていますが、研究者は試験したBビタミン(B1、B2、B3、B5、B6、B7、B12)の中で、成長促進に最も重要な栄養因子がビタミンB5(パントテン酸)であることを発見しました。ビタミンB5は、数多くの代謝反応に関与するコエンザイムAの生合成に不可欠な前駆体として知られており、細胞成長の鍵となる要因です。
代謝物分析でも、基質消費の増加ならびに酢酸塩およびギ酸塩の生成によって、ビタミンB5の刺激特性が確認されました。研究者らは、試験した酵母エキスによって酪酸塩生成にばらつきが見られることを観察しました。アセチルCoA経路による酪酸塩の生成は、チアミン(ビタミンB1)やリボフラビン(ビタミンB2)といった補因子に依存します。いずれも酵母エキスに自然に含まれており、F. ducaniaeの代謝を酪酸塩生成へと導く重要な栄養因子となり得ます。
酵母抽出物と酵母ペプトンの組み合わせでカゼインペプトンを置き換えることにより、研究者はアレルゲン原料や動物由来成分を含まない培養培地を開発しました。さらに、この培地は現行のGMP(適正製造規範)基準に適合することが示されました。
この研究は、フィーカリバクテリウム・ダンカニエの成長と代謝産物の生産パターンが使用する酵母由来栄養素の種類によって大きく影響されることを示しています。
この研究は、培養株の特定の栄養要求を理解することの重要性を強調しています。この理解により、高細胞密度のバイオマスと代謝物の生産を支えるために、最も適切な酵母由来栄養素と成長因子を選択することが可能になります。
特定の微生物やバイオプロセスに最適な酵母由来栄養素を慎重に選択し、培養培地の組成を最適化することで、細胞や代謝物の収量を高め、製造コストを削減し、下流工程や保存中における培養物の安定性に寄与する可能性があります。
腸内微生物の培養における酵母由来栄養素
酵母由来栄養素には、タンパク質、さまざまなサイズのペプチド、遊離アミノ酸、さらにビタミン、ミネラル、核塩基、微量元素などの必須成長因子が含まれています。ただし、その組成は生産プロセスによって異なります。したがって、特定の細菌の栄養ニーズを満たすためには、酵母由来栄養素、または栄養素と成長因子の最適比を含む組み合わせを慎重に選択する必要があります。
ETH Zurichと Procelys by Lesaffre による2023年の共同研究を通じて、酵母由来栄養素を用いた、培養が難しい微生物菌株の最適化について詳しくご覧ください。
出典:L. Bircher, A. M. Sourabié, M. Paurevic, J. Hochuli, A. Geirnaert, C. Navas, B. Drogue, C. Lacroix.2023.Faecalibacterium duncaniae A2-165の成長は、cGMP培地において酵母抽出物とビタミンB5によって強く促進されます。微生物バイオテクノロジー第17巻 第1号 https://enviromicro-journals.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/1751-7915.14374

